Неоколагенез після ін'єкції Ellansé™. Результати дослідження

Автор: П'єр Ніколау, пластичний хірург, викладач, член Міжнародного товариства естетичної пластичної хірургії ISAPS (Франція)

Джерело: KOSMETIK international journal, №3/2013, стор. 62-64

На правах реклами

________________________________________________________________________

Філери Ellanse™ (Ellanse-S, Ellanse-M, Ellanse-L та Ellanse-E), розроблені та вироблені компанією AQTIS Medical BV, є біостимуляторами і, на відміну від інших дермальних філерів, мають стабільну ефективність, унікальну прогнозовану тривалість дії від 1 року (Ellansе™-S) до 4 років (Ellansе™-E) та повну та передбачувану біодеградацію (технологія STaT™). Ellansе™ складається з абсолютно гладких сферичних полікапролактонових (ПКЛ) мікросфер без поперечних зв'язків, однорідно зважених в особливому карбоксиметилцелюллозному (КМЦ) гелі-носії на водній основі. На малюнку 1 показані зображення мікросфер ПКЛ, отримані за допомогою SEM та оптичного мікроскопа, що демонструють гладку поверхню частинок та ідеальну сферичну форму мікросфер.

Мал. 1. Зображення мікросфер ПКЛ, отримані за допомогою SEM та оптичного мікроскопа

ПКЛ і КМЦ успішно використовуються в численних, схвалених CE і FDA саморозсмоктуються матеріалах, що застосовуються в медицині, косметології та фармації – наприклад, у складі інших дермальних філерів, пластичної та щелепно-лицьової хірургії, у пов'язках на рани та контрольованому введенні ліків.

Фізичні характеристики філлера, такі як розмір частинок 25-50 мкм, концентрація, гладка поверхня, ідеально сферична форма частинок, в'язкість та еластичність гелю-носія, однорідність гелю та ін'єкційність, ідентичні для всього сімейства Ellanse™.

Унікальною відмінністю, яка створює прогнозовану тривалість дії, є початкова довжина полімерного ланцюжка ПКЛ всередині мікросфер. Різна початкова довжина цього полімерного ланцюжка є основою регульованої та прогнозованої тривалості дії Ellanse™.

ПКЛ як медичний полімер, що саморозсмоктується, є дуже перспективним завдяки своїй контрольованій і безпечній біодеградації за допомогою гідролізу зв'язків складних ефірів, що призводить до утворення нетоксичних продуктів, які швидко виводяться з організму через природні метаболічні шляхи. Ці дані були отримані в результаті численних наукових досліджень про біосумісність і опубліковані. Повна контрольована біодеградація ПКЛ була доведена у дослідженнях H та C-мічених ПКЛ-імплантатів. Були проведені всебічні дослідження безпеки складу імплантатів Ellanse™, включаючи дослідження в лабораторних умовах, доклінічні та клінічні дослідження. Результати цієї роботи показують, що всі філери Ellansе™ є безпечними та біосумісними та демонструють відмінні характеристики.

Ellansе™ є першим дермальним філером, в якому для волюмізації м'яких тканин використовуються мікросфери ПКЛ, що повністю саморозсмоктуються, без поперечних зв'язків.
Всі ці філери мають маркування CE і представлені на ринку більш ніж у 70 країнах.

Дермальні філери

Хоча всі дермальні філери можуть надавати обсяг після введення, їх можна розділити на дві категорії: стимулюючі вироблення колагену (біостимулятори) і не стимулюють вироблення колагену (волюмізанти). Такі якості нових волокон колагену, як тип і щільність навколо частинок, що лежать в основі філерів, залежать від кількох характеристик дермального філера – зокрема, від обсягу частинок, однорідності мікросфер у гелі, в'язкості та еластичності гелю, часу всмоктування гелю-носія, розміру частинок , розміру мікросфер, форми мікросфер, гладкості/шорсткості поверхні та процесу біодеградації.

Колаген – це основний білок сполучної тканини. Існують різні типи колагену, але у шкірі домінує колаген типів I та III. Колаген типу III найчастіше зустрічається в тканинах, що швидко ростуть. У міру уповільнення росту тіла вміст колагену типу III у шкірі знижується, тоді як вміст колагену типу I, який є більш грубим та стабільним, підвищується.

Колаген у шкірі формується фібробластами. Було зазначено, що в процесі реагування тіла на введення сторонніх тіл з дермальним філером спочатку з'являється колаген типу III, який поступово замінюється колагеном типу I.

Філлер Ellansе™, призначений для імплантації в глибоку дерму і гіподерму, складається з унікальних гладких мікросфер ПКЛ, спеціально розроблених для оптимальної біосумісності. Завдяки оптимальній в'язкості та еластичності гелю-носія зморшки та складки піддаються миттєвій корекції відразу після процедури. Гель-носій поглинається макрофагами поступово протягом декількох тижнів після процедури, протягом яких мікросфери ПКЛ стимулюють неоколагенез, щоб замінити обсяг поглиненого носія. Мікросфери не поглинаються фагоцитами через свій розмір і поверхневі характеристики. Мікросфери ПКЛ запускають природну реакцію людської шкіри та стимулюють природний процес загоєння ран за допомогою неоколагенезу, що призводить до відкладення нового колагену навколо мікросфер.

Метод дослідження

Дослідження проводилося в Central Animal Facility Утрехтського університету (GDL, Голландія) зі схвалення Комітету з етичного ставлення до тварин (DEC, Утрехтський університет, Голландія). Гістологічне фарбування та аналіз виконувались у відділенні патобіології факультету ветеринарії. Дослідження проводилося у відповідності до стандарту ISO 10993: Оцінка біологічної дії медичних виробів; Частина 6 (2007): Дослідження місцевої дії після імплантації.
Двом кроликам (білі новозеландські) інтрадермально латерально вздовж хребетного стовпа була виконана болюсна ін'єкція 0,1-0,2 мл Ellanse-S та Ellanse-M (рис. 2) .

Мал. 2. Фотографія кролика після болюсної ін'єкції ПКЛ дермального філера

Для гістологічного аналізу з кожної області ін'єкції було взято зразок тканини, збережений у нейтральному буферному формаліні 10%. Слайди були звичайним чином пофарбовані гематоксиліном та еозином (HE) і покриті червоним пікросиріусом (PSR). PSR-метод є селективною гістохімічною реакцією для виявлення колагену в обробленій парафіном тканині і використовується як специфічне фарбування для колагену типів I і III. Цей барвник відомий тим, що покращує подвійне променезаломлення волокон колагену. PSR зв'язується з колагеном і демонструє яскравий рефракційний вигляд при освітленні площиною поляризованого світла при спостереженні з використанням схрещених поляризаторів. Неполяризований PSR є специфічним для колагену, що пофарбований у червоний колір. При поляризації великі волокна колагену типу I забарвлюються в жовте або помаранчеве подвійне променезаломлення, тоді як дрібніші волокна колагену типу III виявляють зелене подвійне променезаломлення.

Результати дослідження

Через 9 місяців після ін'єкції

Малюнок 3 демонструє мікрофотографічний знімок гістологічного зразка ін'єктованої тканини, пофарбованого за методикою H&E, через 9 місяців після ін'єкції.

Мал. 3. Мікрофотографічний знімок гістологічного зразка, пофарбованого за методикою H&E, через 9 місяців після інтрадермального введення Ellanse-S: з волосяними фолікулами – вгорі, зрілим дермальним колагеном – у середині, шкірними м'язами – внизу

Мал. 4. Мікрофотографічний знімок PSR-забарвленої тканини під неполяризованим світлом через 9 місяців після введення Ellanse-M. Помітний однорідний розподіл ПКЛ мікросфер та їх фіксація у структурі колагену (*)

Мікрофотографічний знімок демонструє зрілий колаген без будь-яких слідів КМЦ гелю-носія або ПКЛ мікросфер, що вказує на те, що гель-носій та ПКЛ мікросфери саморозсмокталися та були виведені організмом з місця ін'єкції. Мікрофотографічне зображення тканини під неполяризованим світлом через 9 місяців після введення Ellanse™-M показане на малюнку 4.

Забарвлення в червоний колір підтверджує утворення нового колагену навколо мікросфер ПКЛ, що призводить до фіксації структури колагену мікросфер ПКЛ. Мікросфери ПКЛ все ще однорідно розподілені, а довкола імплантату не було виявлено ні міграції, ні інкапсуляції.

Малюнок 5 демонструє докладніше зображення тієї ж ін'єктованої тканини. Через 9 місяців після ін'єкції мікросфери Ellansе™-M, як і раніше, мають сферичну форму і не порушені на цьому етапі процесу саморозсмоктування. Мікрофотографічний знімок неполяризованого PSR-забарвленого гістологічного зразка підтверджує відкладення колагену (рис. 5a) . Поляризоване (рис. 5b) PSR-фарбування виявило присутність як червоно-жовтогарячого, так і зеленого подвійного променезаломлення, що вказує на відкладення волокон колагену типів I і III, отже, підтверджує неоколагенез, викликаний абсолютно гладкими і сферичними мікрочастинками. Через 9 місяців після ін'єкції мікросфери ПКЛ закріплені у новому колагені з високоякісною структурою.

Мал. 5a. Мікрофотографічне зображення PSR-забарвленої тканини під неполяризованим світлом через 9 місяців після введення Ellansе™-M. Малюнок демонструє нову сформовану структуру колагену

Мал. 5b. Мікрофотографічне зображення PSR-забарвленої тканини під поляризованим світлом через 9 місяців після введення Ellansе™-M. Малюнок демонструє типове оранжево-червоне та зелене подвійне променезаломлення з червоним (позначено стрілками) колагеном типу I та зеленим (позначено наконечниками) колагеном типу III

Через 21 місяць після ін'єкції

На малюнку 6 представлений мікрофотографічний знімок тканини через 21 місяць після введення продукту Ellanse™-M (під (a) неполяризованим світлом та (b) поляризованим світлом). Мікросфери Ellansе-M все ще присутні, вбудовані в структуру колагену. Поляризоване PSR-фарбування (рис. 6b) демонструє присутність червоно-жовтогарячого подвійного променезаломлення, виявляючи наявність волокон колагену типу I.

Мал. 6a. Мікрофотографічний знімок PSR-забарвленого гістологічного зразка під неполяризованим світлом через 21 місяць після введення Ellanse-M. Червоне фарбування підтверджує утворення нового колагену

Мал. 6b. Мікрофотографічний знімок PSR-забарвленого гістологічного зразка під поляризованим світлом через 21 місяць після введення Ellanse-M. Червоне фарбування свідчить про наявність волокон колагену типу I

Висновки

Подані дані демонструють біосумісність та саморозсмоктування ПКЛ дермального філера. Гістологічний аналіз підтвердив, що мікросфери ПКЛ обох версій продукту викликають формування нового колагену. Завдяки гладкості та сферичній формі мікрочастинок ПКЛ формується високоякісна структура нового колагену.

Через дев'ять місяців мікросфери ПКЛ продукту Ellanse-S повністю саморозсмокталися. Це узгоджується з даними клінічного дослідження після обробки носогубної складки, коли клінічна ефективність знизилася через 12 місяців.

Мікросфери ПКЛ продукту Ellansе™-M все ще були присутніми через 9 місяців після введення, як і раніше, мали сферичну форму і були однорідно розподілені в тканині, без ознак міграції або інкапсуляції. Мікросфери ПКЛ продукту Ellansе™-M все ще були присутні через 21 місяць після ін'єкції, вбудовані в структуру колагену, що складається переважно з волокон колагену типу I. Таким чином, отримані дані демонструють впевнену і довготривалу присутність колагену і заміщення колагену типу III більшими I, що узгоджується з нормальним фізіологічним процесом загоєння ран.